慢病毒坦白局：从科研奢侈品，到您的实验桌上宾

大家好，我是一枚慢病毒。

我曾是科研圈的“硬通货”。

身价过万，订单需审批，只服务于最“壕”的实验室。构建一个稳转株，筛选一个细胞模型，我的出场，往往意味着一个重大项目启动了。那时的我，是预算的试金石，是课题高度的象征。

但时代变了！

感谢技术的飞速发展与规模化生产，我终于可以“飞入寻常实验室”了！曾经需要重金礼聘的我，现在不到4000元，就能成为您实验台上的常备武器。是的，你没看错，从五位数到如今的四位数，我的身价实现了“断崖式亲民”。

曾有人问我：“你身价从上万跌到不足四千，是不是‘廉颇老矣’？”

我总会笑着回答：“非也，是我所在的整个行业，完成了一场‘工业革命’。” 

从前我身价矜贵，是因为我的诞生，曾是一场耗时费力、充满不确定性的“手工艺”：低产量、高物料成本、纯化步骤繁琐、回收率就像开盲盒，成本居高不下。

现在的我，经历了从静态贴壁的小量制备到动态悬浮的规模化生产，从粗放纯化的低回收率到切向流过滤与层析技术的高精度纯化^[1]。

所以，我的身价“暴跌”，本质是生产效率的“暴增”和品质控制的“飞跃”。

身价降低，不等于实力打折

我不再是那个需要被小心翼翼“供养”起来的珍贵试剂，而是你实验设计中可以大胆调用、灵活组合的常规武器。我依然拥有那份稳定、高效、能感染难转染细胞的看家本领。我带来的稳定基因过表达或干扰效果，依然是您功能研究中最可靠的倚仗。我的目标，是成为你科研工具箱里，那颗最可靠、最常用的“螺丝钉”。

那么，如今身价亲民的我，能在哪些战场上为您效力呢？

使用慢病毒感染肿瘤细胞，构建circRNA-MET 基因过表达和干扰稳定株体外模型，然后通过细胞功能学实验发现该基因敲低后会抑制肿瘤细胞增殖、细胞克隆形成及肿瘤球的形成，过表达后情况正好相反；体内实验的话，通过裸鼠荷瘤，发现circRNA-MET基因被干扰之后显著抑制了体内肿瘤生长的状态。因此，确定了circRNA-MET是一个重要的促癌分子。基于这一发现，针对circRNA-MET设计抑制性药物，可能成为一种具有潜力的新型抗癌策略。”

图1 高表达的circ-MET蛋白能够促进 NONO-TFE3型肾透明细胞癌的增殖^[2]

使用慢病毒sgRNA文库分别感染KBM7和HL60细胞，利用依托泊苷和6-硫鸟嘌呤对其进行正选择筛选。结果显示，若细胞在特定gRNA介导的基因敲除后，能分别在依托泊苷或6-TG的处理下存活并增殖，则该gRNA所靶向的基因被认为与相应的药物耐药性相关。通过此策略，作者成功鉴定出：在依托泊苷筛选中，TOP2A 和 CDK6 的缺失可能导致耐药；在6-TG筛选中，MSH2、MSH6、MLH1 和 PMS2 这四个DNA错配修复通路关键基因的缺失可能导致耐药。

图2慢病毒型 CRISPR/Cas9 系统进行基因筛查的联合方法^[3]

使用慢病毒构建HER2基因CAR慢病毒，随后感染原代T细胞，接着将抗hHER2 CAR-T细胞与表达HER2的人ICC细胞系HuCCT-1共培养，评估T细胞特异性杀伤能力，模拟临床中CAR-T疗法靶向实体瘤的场景。

图3 T细胞特异性杀伤 ^[4]

使用携带GFP/ KRASG12D的慢病毒转染胆囊类器官，KRASG12D抑制剂能够显著抑制GBO-831-KRASG12D表现的胆囊上皮的恶性转化（核质比改变、核异型性及有丝分裂）但并未导致GBO-819-KRASG12D的恶性转化。揭示KRAS信号通路在肠化生性胆囊上皮的肿瘤发生中起关键作用。

图4 携带GFP/ KRASG12D的慢病毒转染胆囊类器官^[5]

通过构建GFP-Luc-puro三标工具慢病毒，感染 MKN45细胞建立稳转株，而后建立胃癌肺转移模型，通过生物发光成像，作者发现每天腹腔注射5 mg/kg ICI-118,551（β2-AR阻断剂），持续4周，完全消除了肿瘤移植后抑郁症引起的GC肺转移。

图5 β2-AR阻断剂抑制CUMS小鼠模型中抑郁诱导的GC肺转移^[6]

构建了Cdc42-ca和Cdc42-dn慢病毒，并将病毒使用脑定位方式双侧注射到帕金森病模型小鼠的尾壳核（CPu）脑区，病毒表达3周后进行检测。发现过表达Cdc42-ca可逆转MPTP诱导的树突棘异常（如棘头宽度和体积增大）和行为缺陷。过表达Cdc42-dn则模拟了帕金森病的表型，导致树突棘形态异常和行为障碍。

图6 Cdc42 活性在调节帕金森病小鼠脊柱可塑性过程中的作用^[8]

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