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操作指南 | AAV感染肠道该怎么注射？
413 人阅读发布时间：2025-08-15 15:53
AAV感染肠道的常用注射方式包括：肠系膜上动脉（superior mesenteric artery, SMA）注射、灌肠、尾静脉注射和腹腔注射等。其中尾静脉注射和腹腔注射作为系统性给药方式，优势在于操作简单，对动物损伤小，但是所需注射量大且特异性不强；灌肠的方式转导效率有限，感染结肠概率更大；SMA注射的转导效率较高，主要感染小肠和结肠，但手术难度较大，对动物损伤也较大。
在往期的【操作指南】系列中，我们已经介绍过尾静脉注射和腹腔注射的具体步骤。本期与大家分享的是灌肠递送方式和SMA注射方式。
灌肠递送
①小鼠禁食12小时后用异氟醚麻醉。
②将软导管从其肛门插入约4cm，通过导管缓慢注入病毒液体，注射完毕后抽出导管。
③将小鼠保持悬倒状态60s以上，以确保液体在结肠中的均匀分布。
④待小鼠复苏后可以恢复正常饮水及饮食。
SMA注射
①将麻醉后小鼠右侧卧位固定，持续给予异氟烷。
②剃除小鼠左侧腋线肋下区域毛发，暴露皮肤并对其进行消毒。
③在左侧脾脏区域沿腋线和侧腹部的皮肤上做一个1-2厘米的切口，切开腹外斜肌，用微型牵开器牵开皮肤和腹壁，将小肠移开并用温生理盐水纱布覆盖，以暴露SMA（图A）。
④在20倍显微镜下将SMA与腹膜后组织分离，在SMA近端用一个小的结扎带来固定注射针，用微血管夹暂时切断腹主动脉的血液供应（图B）。
⑤用33号1/2针头连接注射器轻轻插入SMA，注入病毒液体，用结扎带轻扎血管，防止注射部位渗漏（图C）。通过手术显微镜对注射过程进行观察以确保准确性。
⑥注射完成后立即拔针，缝合SMA注射部位，移除结扎带和微血管夹恢复小肠血流，用无菌棉签轻压注射部位止血（图D）。
⑦在腹腔内注射1ml无菌温生理盐水后，对小鼠进行缝合。
⑧术后每15分钟对动物进行一次监测，直至其能稳定保持俯卧姿态；之后每天监测2次，直至放回笼中。
SMA注射操作
(Stacy L Porvasnik, et al., Microsurgery, 2010)
参考文献
[1] J Gene Med. 2016 Oct;18(10):261-272. doi: 10.1002/jgm.2899.
[2] Microsurgery. 2010 Sep;30(6):487-93. doi: 10.1002/micr.20767.