和元生物技术(上海)股份有限公司 品牌商

12 年

手机商铺

商家活跃:
产品热度:
自营

OBiO 和元生物

试剂/技术服务/细胞库 / 细胞培养

已认证
品牌介绍
和元生物技术(上海)股份有限公司(股票代码:688238)成立于2013年,是一家聚焦基因治疗领域的生物科技公司,专注于为基因治疗的基础研究提供基因治疗载体研制、基因功能研究、药物靶点及药效研究等CRO服务,为基因药物的研发提供工艺开发及测试、IND-CMC药学研究、临床样品GMP生产等CDMO服务。公司以“赋能基因治疗,共守生命健康”为使命,围绕病毒载体研发和大规模生产工艺开发,打造了基因治疗载体开发技术;基因治疗载体生产工艺及质控技术两大核心技术集群,建立了适用于多种基因药物的大规模、高灵活性GMP生产体系,向基因治疗领域提供:①质粒、腺相关病毒、慢病毒等载体产品;②溶瘤疱疹病毒、溶瘤痘病毒等多种溶瘤病毒产品;③CAR-T等细胞治疗产品的技术研究、工艺开发和GMP生产服务。基于公司自主搭建的分子生物学平台、实验级病毒载体包装平台、细胞功能研究平台、SPF级动物实验平台、临床级基因治疗载体和细胞治疗工艺开发平台、质控技术研究平台等全面的技术平台,依托公司已有的近5000平米研发中心、超10000平方米基因治疗载体GMP生产中心,以及在上海自由贸易试验区临港新片区建设中的77,000平方米精准医疗产业基地,公司将坚持以客户为中心、以提供专业服务为己任,打造国际领先的基因和细胞治疗CXO集团企业,加快基因治疗的基础研究、药物发现、药学研究、临床和商业化进程,推动基因治疗行业发展,造福人类健康!
品牌商

和元生物技术(上海)股份有限公司

入驻年限:12 年

  • 联系人:

    张女士

  • 所在地区:

    上海

  • 业务范围:

    技术服务

  • 经营模式:

    科研机构

在线沟通

公司新闻/正文

载体构建、慢病毒包装整体服务及应用介绍

人阅读 发布时间:2020-03-27 14:29

1.1 慢病毒介绍
慢病毒载体(Lentivirus)是一类改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒载体,是逆转录病毒的一种,基因组是 RNA,其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代,属于假型病毒。可利用逆转录酶将外源基因整合到基因组中实现稳定表达,借助慢病毒载体可以进行基因的过表达、干扰、敲除和内源性激活等操作,满足不同的基因操作需求,同时慢病毒具有感染分裂期与非分裂期细胞的特性。
慢病毒基因组进入细胞后,在细胞浆中反转录为 DNA,形成 DNA 整合前复合体,进入细胞核后,DNA 整合到细胞基因组中。整合后的 DNA 转录成 mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白;或产生小 RNA。慢病毒介导的基因表达或小 RNA 干扰作用持续且稳定,并随细胞基因组的分裂而分裂(图 1)。
图 1 慢病毒的包装和侵染细胞过程
慢病毒载体具有宿主范围广,免疫原性低,基因容量大,可以长期表达等特点。能够有效地感染培养的肿瘤细胞、肝细胞、心肌细胞、神经元、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。
慢病毒的感染具有整合特性,能够将外源基因有效地整合到宿主染色体上,达到持久性表达,因而可构建稳定细胞株,用于基因的细胞功能研究。使用慢病毒载体改造 T 细胞可用于 CAR-T 细胞治疗,CRISPR/Cas9 文库构建使用的也是慢病毒载体。
1.2 慢病毒载体优势
1)表达时间长:慢病毒可将外源基因整合到宿主细胞基因组上,实现基因长时间稳定的表达,不随细胞分裂传代而丢失,是细胞实验的较好的选择,常用于构建稳定株。
2)安全性高:未发现致病性,慢病毒载体改造 T 细胞用于 CAR-T 细胞治疗。
3)免疫原性低:直接注射活体组织不易造成免疫反应,适用于动物实验。
不同病毒载体特点
  慢病毒 腺相关病毒 腺病毒 逆转录病毒
包膜
颗粒直径 90-100 nm 20-30 nm 60-90nm ~100nm
基因组 dsRNA ssDNA dsDNA RNA
插入目的片段大小 4kb左右 2.8kb 左右 6kb 左右 1kb 左右
外源基因表达时间 2-4 天开始表达,长时间稳定表达 7-14 天开始表达 1-2 天开始表达,作用时间 2 周左右 2-3 天开始表达
体内扩散能力 一般 一般
免疫原性 中等 极低 中等
滴度范围 108~109TU/mL 1012-1013VG/mL 1010-1011PFU/mL 107~108TU/mL
滴度检测方法 qPCR 整合 DNA qPCR 非整合 DNA 抗原抗体免疫染色试剂盒 qPCR 整合 DNA
整合方式 随机高频整合 定向低频整合(rAAV不整合) 非整合 随机整合
应用范围 体外细胞感染,gRNA 文库筛选,体内 基于不同的血清型,体内广泛应用 嗜肝,快速表达或短期表达,血液、心脏,细胞系等  特异性只感染分裂期的细胞

1.3 常规应用
体外感染细胞
慢病毒载体能够有效地感染培养的肿瘤细胞、肝细胞、心肌细胞、神经元、内皮细胞、干细胞等多种类型原代细胞和大部分细胞系。
慢病毒的感染具有整合特性,能够将外源基因有效地整合到宿主染色体上,因而可以达到持久性表达,从而构建稳转细胞株,用于基因的细胞功能研究。
慢病毒体外感染细胞的效果图

常见MOI列表
细胞名 中文名称 慢病毒感染MOI
MGC80-3 人胃癌细胞 10
HT-29 人结肠癌细胞 20
RKO 人结肠腺癌细胞 10
Caki-1 人肾透明细胞癌皮肤转移细胞 10
5637 人膀胱癌细胞 10
U-118 MG 人脑星形胶质母细胞瘤 10
RWPE-1 人正常前列腺上皮细胞 20
HeLa 人宫颈癌细胞 10~20
Ca Ski 人宫颈癌肠转移细胞 10
MCF7 [MCF-7] 人乳腺癌细胞 10
A549 人非小细胞肺癌细胞 10(中科院为40-80)
NCI-H1299 人非小细胞肺癌细胞 20
U-87 MG 人脑星形胶质母细胞瘤 10
U251 人胶质瘤细胞 10
A172 人胶质母细胞瘤细胞 10
K-562 人慢性髓原白血病细胞 10
HL-60 人原髓细胞白血病细胞 10
GES-1 人胃上皮细胞 20
U266 人骨髓瘤细胞 20
CAL 27 人舌鳞癌细胞 20
PC9 人肺癌细胞 5
PC14 人肺癌细胞 10
MADB-106 大鼠乳腺癌细胞 20
F98 大鼠脑胶质瘤细胞 20
MHCC-97H 人肝癌细胞(高转移) 10~20

1.4 案例介绍(和元客户文章)
1.4.1 慢病毒在肿瘤研究中的应用
常通过构建稳转株,体外进行细胞功能学实验,进一步构建肿瘤模型,验证基因功能。

1.Nature Communications. (IF=12.353). Shi Y,et.al. (2017). Tumour-associated macrophages secrete pleiotrophin to promote PTPRZ1 signalling in glioblastoma stem cells for tumour growth.[慢病毒, 胶质细胞瘤]
慢病毒干扰: Lenti-shNT/shPTN/shPTPRZ1
2. Hepatology. (IF=14.079). Ma JZ,et.al. (2016). METTL14 suppresses the metastatic potential of HCC by modulating m6 A-dependent primary miRNA processing. [慢病毒, 肝癌]
慢病毒过表达/干扰pLV-CMV-PGK-EGFP-T2A-puro/ pLV-U6-shRNA-CMV-EGFP-T2A-puro
1.4.2 慢病毒在神经系统的应用(在体注射)
1.Nature Neuroscience. (IF=19.912). Ding XL,et.al. (2017). Activity-induced histone modifications govern Neurexin-1 mRNA splicing and memory preservation. [慢病毒, 学习与记忆]
病毒类型:慢病毒
载体名称:LV-Suv39h1-RNAi(不确定详细的)
注射部位:海马 DG 区
病毒注射量:2 μL,9.98 × 108 TU/mL
检测时间:2 周

2.Nature Communications. (IF=12.353). Yao XH,et.al. (2016). Electrical coupling regulates layer 1 interneuron microcircuit formation in the neocortex. [慢病毒, 神经环路]
病毒类型:慢病毒
载体名称:LV- CX36-shRNA-EGFP(不确定详细的)
注射部位:P1 小鼠新皮层 L1
病毒注射量:1μL
检测时间:2 周
3.Molecular Psychiatry. (IF=11.64). Guo DJ,et.al. (2019). Autism-like social deficit generated by Dock4 deficiency is rescued by restoration of Rac1 activity and NMDA receptor function. [慢病毒, 自闭症]
病毒类型:慢病毒
载体名称:Lenti-CMV-EGFP-P2A-3FLAG-Rac1
注射部位:小鼠海马 CA1 区
病毒注射量:1μL
检测时间:4 周
1.5 慢病毒延伸服务
和元上海慢病毒的生产和质控采取了国际学术界公认的标准流程,采用三质粒或四质粒系统在293T细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速离心纯化,并通过 qPCR 对病毒基因拷贝进行滴定。一般情况下我们的慢病毒的滴度在108~109TU/ml,完全可以满足各类实验的使用要求。
 

上一篇

叮咚!请接收你的圣诞大大大大大Surprise!

下一篇

“和学堂” 和你一起进步

更多资讯

询价列表

暂时没有已询价产品

快捷询价 发送名片
    当你希望让更多商家联系你时,可以勾选后发送询价,平台会将你的询价消息推荐给更多商家。